本发明属于基因工程技术领域,具体涉及CpVQ20基因过表达载体及构建方法和用途。所述CpVQ20基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的CpVQ20基因用于抑制烟草中的白粉病菌生长发育,所述CpVQ20基因用于清除烟草中的ROS,用于烟草的抗病性品种培育,还能够促进烟草抗病相关基因的表达。
1.CpVQ20基因在提高烟草对白粉病的抗性中的应用,其特征在于,所述CpVQ20基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.CpVQ20基因在用于烟草的抗白粉病品种培育中的应用,其特征在于,所述CpVQ20基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.CpVQ20基因的过表达载体在提高烟草对白粉病的抗性中的应用,其特征在于,所述CpVQ20基因的过表达载体由权利要求1所述CpVQ20基因构建获得。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述CpVQ20基因的过表达载体的构建步骤如下: 通过PCR扩增如SEQ ID NO.1所示的ORF两端含有 BamHI 和 KpnI 的酶切位点的目的基因CpVQ20; 将目的基因CpVQ20与pMD19-T载体进行连接得到重组产物后,大肠杆菌感受态细胞转化,获得质粒; 用限制性内切酶 BamHI 和 KpnI 分别酶切质粒和p1301载体,并分别回收目的基因片段和p1301载体线性片段; 将目的基因片段和p1301载体线性片段进行连接,获得连接产物; 将连接产物转化大肠杆菌感受态细胞,获得CpVQ20基因的过表达载体。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述PCR扩增的反应体系为:premix Taq25 μL,上游引物2.5μL下游引物2.5μL,ddH2O 15μL,cDNA 5 μL。
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