政策资讯

一种燕麦SNP育种芯片的开发方法及其应用

专利类型:
发明
申请号/专利号:
CN202310319628.7
申请人(专利权人):
内蒙古农业大学
行业类别:
C12N15/11 C12Q1/6895 C12Q1/6806
技术成熟度:
成熟
公布时间:
2024-05-28
证书状态:
有效
交易价格:
面议
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交易流程

委托经理人

本发明涉及遗传学、分子生物学、生物信息学和燕麦分子育种领域、以及全基因组基因芯片技术领域,更具体涉及一种燕麦SNP育种芯片开发方法及其应用。本发明的燕麦50K SNP靶向捕获探针包含燕麦50K SNP位点探针,所述燕麦50K SNP位点探针是根据燕麦50K(共计58900个)SNP分子标记合成的单链DNA。该燕麦50K SNP靶向捕获探针可快速、有效地追踪燕麦的遗传物质,有利于加快燕麦育种进程,提高新品种选育效率。本发明与以往的6K燕麦芯片相比,具有更多的位点数量、广泛的遗传多样性、更均匀的覆盖染色体、芯片更加灵活、拥有更高的检出率和更好的重复性。

1.一种燕麦50K SNP靶向捕获探针,其特征在于,包含燕麦50K SNP位点探针,所述燕麦50K SNP位点探针是根据燕麦50K SNP分子标记合成的单链DNA,所述50K SNP位点包括如下所示的核心SNP分子标记: 1~104:chr1A:5283582、7103302、10734851、10945761、11664332、14467396、15047396、16398486、21270926、25425155、29414961、75223307、101003855、115488498、135276592、148522929、202683424、205620149、222308771、229586249、234567116、240417456、253749877、281357546、293747404、298042526、298551987、304720100、308580466、315853787、316067487、317504915、323176649、323573314、326044569、331209279、331937768、331978174、340045388、342258714、346927231、352153597、352895025、353681133、353814760、354406639、356296360、357079009、359814991、360764207、361568511、364411537、366545162、368905078、370338339、370873141、371665959、371666020、378118472、378609831、381550595、381678547、382379106、383609412、385331788、387527211、387561633、388365359、390782899、391759928、392823534、396147375、401560695、405883242、407306848、407534418、408130557、415475150、420947480、430805639、451372954、461369888、462031762、472352616、484252481、488853414、495087041、499171795、502654285、506758067、507037483、509192469、509662645、515161916、515262213、517095456、522371782、525396862、527223945、528829545、533025127、539185410、540315630、540617233; 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1628~1718:chr4D:11485004、14717658、15065859、31961722、32485235、33560371、35156356、39740867、42795157、44433053、59143960、61439239、78867509、83710252、94577427、97342443、99630391、102329405、114879597、135083886、138944406、139191630、145275183、158199248、183847307、197618490、202008461、208924184、214257428、217116193、218226761、220722019、224527103、226305656、242931934、249581054、255462900、264284840、267548200、268330950、271337080、272128244、274673552、277597999、284757400、292115085、295208268、307122231、312785806、315358650、320106105、321257483、322335201、331354099、347449985、349565426、355005406、355529054、357699853、363770741、375262472、377476161、380726205、385800811、391193802、394067252、394991049、398011595、398021682、402631607、403614105、404368909、407333043、410646224、412188909、414401279、418371869、418997245、421372071、421555572、428897486、430839695、432215688、440437664、441165072、443760645、446977976、448126463、451246460、453204068、454964761; 1719~1790:chr5D:422491、2403544、2847753、8070862、9173118、15344875、20080029、20241303、23719531、24894899、42951694、44107567、48815715、49508914、51945197、56013951、62539497、149532814、182274396、224230643、244783821、258584112、274219604、300870135、312225241、324387095、334868009、336719110、346038010、346469081、346469183、354514206、366731773、378137934、379881301、380071905、392150519、396806532、401607567、401827548、403566921、407953083、414598189、418669755、418689444、420799211、425328381、436638413、438696800、438952723、445810673、450854676、455970239、459069234、460850708、460986821、471757307、472785728、480109072、484436332、484877489、487723676、489342416、490270563、491681200、492912927、494028859、495132865、495470919、495962366、497177907、498614358; 1791~1842:chr6D:2682247、4232838、4870848、5106374、5438355、8149967、9044749、16567192、21833434、25107483、30733743、31648517、35568291、37263838、38266044、42699055、47536590、82721650、111693433、111859680、122698189、143238944、150943424、162140158、167080037、167154453、192530085、193391439、199476613、206222045、213515826、230263674、239136051、243811626、244217054、253294894、256771000、259859605、272370825、273611234、283670850、285381472、286820765、289202530、290801536、291677712、292070963、292447424、294444168、294755480、296249886、298013338; 1843~2000:chr7D:1072783、1119801、1236244、1534371、2991626、6484731、8526949、12785153、16242070、17366942、17850661、22956474、24096794、28468246、36005342、36246561、38201748、44727899、51458782、52893291、54121226、57516030、57516038、67534447、70410781、71268375、74183904、77122480、80597019、80953710、91190332、97784606、101125798、101646423、103077178、107623530、109736013、109968936、109968972、115007259、118525929、122982073、128880373、129122344、130575310、144416893、144696534、147934872、151212412、156658652、159001645、159202650、161327586、163948311、181525332、182392553、185716424、192236268、197083938、200305527、200305588、203992071、205384321、207873222、211308312、213859261、215658345、221747688、227132133、237365568、238457399、240373853、240497344、251811510、252160256、257692302、265633476、276461950、281656816、281673877、281673955、282186605、288940800、289015491、295863972、297712659、300964765、301738058、302186316、305064006、305958757、309078989、309792985、310443347、311730518、317299513、318083871、320706656、327935646、330094148、334523638、334550921、335532754、339511013、341280805、348832923、348856568、362000098、371871465、374671605、379217936、381999320、388319071、392108332、403165236、405370611、412711051、412974598、423689553、425896659、434160829、434379013、435977775、437395621、445058667、449281896、452187250、455142358、462212286、466485714、469010673、469111622、469111697、474002520、476702195、479594709、480535689、483206258、488775954、493156510、493471148、495673345、497521926、503762348、506063835、507610286、508855720、511766848、512617462、514968304、515513948、516813821、519702746、520048073、521311574、524439726、525367002、527908773; 其中,chr1A、chr2A、chr3A、chr4A、chr5A、chr6A、chr7A、chr1B、chr2B、chr3B、chr4B、chr5B、chr6B、chr7B、chr1C、chr2C、chr3C、chr4C、chr5C、chr6C、chr7C、chr1D、chr2D、chr3D、chr4D、chr5D、chr6D、chr7D 表示SNP位点所在的染色体ID,染色体ID后面的数字表示SNP位点在染色体上所处的位置。

2.根据权利要求1所述的一种燕麦50K SNP靶向捕获探针,其特征在于,所述探针的5’端带有生物素基团,所述探针通过C12分子臂和氨基修饰偶联在荧光微球上,每个荧光微球偶联一种探针。

3.权利要求1所述的一种燕麦50K SNP靶向捕获探针的制备方法,其特征在于,包括: 步骤1:筛选燕麦50K SNP位点; 燕麦50K SNP位点通过下述方法筛选获取: 步骤1.1:根据多份燕麦种质的重测序数据,比对燕麦参考基因组检测所有样本基因组上的SNP位点,用于目标SNP位点的挑选; 步骤1.2:根据开源的简化基因组测序数据,比对燕麦参考基因组检测所有数据中的SNP位点,用于目标SNP位点的挑选; 步骤1.3:根据燕麦6K芯片位点,挑选目标SNP位点; 步骤1.4:根据公开发表的燕麦功能性标记位点筛选SNP位点; 步骤2:设计并制备燕麦50K SNP位点探针。

4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于, 所述目标SNP位点按以下标准挑选:MAF≥0.05,NA<5%,杂合率<5%,染色体均匀分布。

5.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述燕麦50K SNP位点探针的设计过程为: 步骤2.1:确定探针设计原则: 探针长度120bp、探针GC含量在25%~69%之间,同源性区域个数≤3,选取区域最大限度地不包含SSR和GAP区域;结合染色体均匀分布原则; 步骤2.2:然后以步骤1获得的SNP位点为中心,筛选其左右120bp中GC含量最接近45%的120bp核苷酸序列作为探针; 步骤2.3:根据步骤2.2筛选得到的120bp核苷酸序列合成5’端带有生物素基团修饰的单链DNA,得到燕麦50K SNP位点探针。

6.燕麦50K SNP分子标记、以及燕麦50K SNP位点探针在燕麦50K SNP靶向捕获探针制备中的应用,其特征在于,所述燕麦50K SNP位点探针是根据燕麦50K SNP分子标记合成的单链DNA,所述50K SNP位点包括权利要求1中所示的核心SNP分子标记。

7.燕麦50K SNP分子标记、燕麦50K SNP位点探针在以下任一项中的应用: (1)燕麦遗传多样性分析; (2)燕麦分子遗传图谱构建; (3)燕麦全基因组关联分析; (4)燕麦品种真实性鉴定; (5)燕麦分子标记辅助选择育种; (6)燕麦全基因组选择育种; 所述燕麦50K SNP位点探针是根据燕麦50K SNP分子标记合成的单链DNA,所述50K SNP位点包括权利要求1中所示的核心SNP分子标记。

8.权利要求1所述的燕麦50K SNP靶向捕获探针在以下任一项中的应用: (1)燕麦遗传多样性分析; (2)燕麦分子遗传图谱构建; (3)燕麦全基因组关联分析; (4)燕麦品种真实性鉴定; (5)燕麦分子标记辅助选择育种; (6)燕麦全基因组选择育种。


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